Laporan Bilogi : Pewarnaan Gram pada Bakteri

Pewarnaan Gram pada Bakteri

Oleh :

1.          Ullya Nazhifatul Ulum (31)

2.          Citra Aulia Stevani(08)

v      TUJUAN PRAKTIKUM

1.     Untuk mengetahui bakteri Lactobacillus casei termasuk ke dalam bakteri gram negatif atau bakteri gram positif.

2.     Untuk mengetahui dan juga memahami bentuk dari bakteri Lactobacillus casei pada minuman yakult.

v      LANDASAN TEORI

§  Bakteri  mempunyai morfologi, struktur dan sifat-sifat yang khas. Bakteri merupakan mikroorganisme yang berukuran mikroskopik. Selain mikroskopik, bakteri juga hampir tidak berwarna atau transparan dan kontras dengan air. Sehingga melihat dan mengamati bakteri dalam kedaan hidup sangat sulit. Untuk mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bakteri. Ini merupakan salah satu cara yang paling utama dalam penelitian-penelitian mikrobiologi. Hal itu untuk mempermudah proses identifikasi  bakteri.

§  Bakteri juga dapat dibedakan melalui teknik pewarnaan gram. Teknik pewarnaan gram tersebut dapat menghasilkan warna merah dan ungu. Bakteri gram negatif ditandai dengan pewarnaan ungu sedangkan yang positif berwarna merah. Hal ini bertujuan untuk memberikan warna pada bakteri pada akhirnya dapat diidentifikasi dengan mudah. Selain itu, ada endospore yang bisa diwarnai. Endospora adalah organisme yang dibentuk dalam kondisi yang stres karena kurang nutrisi, yang memiliki kemungkinan untuk tetap berlanjut di lingkungan sampai kondisi menjadi baik (Rudi, 2010).

§  Pada praktikum proses pewarnaan gram olesan bakteri yang terfiksasi dikenai larutan-larutan berikut dalam urutannya yaitu ungu kristal, larutan yodium, alkohol (bahan pengecat), dan safranin atau beberapa pewarna tandingan lain yang sesuai. Bakteri yang diwarnai dengan metode gram ini dibagi menjadi dua kelompok. Salah satu di antaranya, bakteri gram positif, mempertahankan zat pewarna ungu kristal. Di gunakan untuk pengecatan differensial, menggunakan beberapa jenis zat, di gunakan untuk mengelompokkan bakteri, seperti pengecatan gram atau pengecatan acid-fast, bakteri gram negatif, kehilangan ungu kristal ketika dicuci dengan alkohol, dan sewaktu diberi pewarna tandingan dengan warna merah safranin, tampak berwarna merah(Pelczar dan Chan, 1986).

v      METODE PRAKTIKUM (alat dan bahan)

a. Alat

a.     Aquades                                                 g. Object glass

b.     Bak pewarnaan                                      h. Pembakar spiritus

c.      Batang ose                                   i. Tabung reaksi

d.     Kertas saring                                j. Kapas

e.      Korek api                                     k. Pipet tetes

f.       Mikroskop medan terang             l. Tissue

b. Bahan

a. Air fuchsin                                   f. Lugol

b. Alkohol 70%                               g. Minyak imersi

c. Alkohol 96%                                h. Suspensi Lactobacillus casei

d. Air atau aquades                       i. Xylol

e. Karbol gentian violet   

v      METODE PRAKTIKUM (cara kerja)

1.     Siapkan alat dan bahan.

2.     Lalu bersihkan Objecy glass menggunakan alkohol 70% sampai bersih agar terbebas dari lemak.

3.     Setelah itu, panaskan Object glass menggunakan pembakar spiritus.

4.     Kawat ose dipijarkan di atas pembakar spiritus lalu dinginkan.

5.    Kawat ose dicelupkan ke dalam suspensi bakteri biakan  (Lactobacillus casei)

6.     Bakteri di batang kawat ose digosokan pada kaca preparat.

7.  Preparat dikeringkan di atas hawa hangat api kemudian setelah kering difiksasi di atas nyala api sebanyak tiga kali.

8.     Preparat didinginkan beberapa detik.

9.   Preparat tersebut kemudian ditetesi dengan zat warna karbol gentian violet dan didiamakan selama 30 detik.

10.   Zat pewarna yang berlebih dibuang lalu dicuci dengan air.

11. Preparat ditambah klarutan lugol sebagai zat pemantek selama 30 detik. Preparat dicuci dengan air.

12. Preparat ditetesi dengan alkohol 96% selama 2 detik sampai zat warna larut, kemudian preparat dicuci dengan air.

13. Preparat tersebut ditetesi dengan zat warna pembanding air fuchsin selama 30 detik, lalu preparat dicuci dengan iar.

14. Preparat dikeringkan dan di atasnya diberi 1 tetes minyak imersi untuk menghindrkan indeks bias.

15.     Preparat diamati di bawah mikroskop.

v      HASIL DAN FOTO

Setelah melakukan percobaan tersebut dan kemudian di dapatkan hasil foto dari bakteri itu menggunakan mikroskop.

Jenis Bakteri	Bentuk bakteri
Lactobacillus casei	Monobacillus

v      PEMBAHASAN

ü a.  Bakteri Gram Negatif

Bakteri gram negative adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna metil ungu pada metode pewarnaan Gram. Bakteri gram positif akan mempertahankan warna ungu gelap setelah dicuci dengan alcohol, sementara bakteri gram negative tidak.

ü b.  Bakteri Gram Positif

Bakteri gram positif adalah bakteri yang mempertahankan zat warna metil ungu sewaktu proses pewarnaan Gram. Bakteri jenis ini akan berwarna biru atau ungu di bawah mikroskop, sedangkan bakteri gram negative akan berwarna merah muda. Perbedaan klasifikasi antara kedua jenis bakteri ini terutama didasarkan pada perbedaan struktur dinding sel bakteri (Aditya,2010).

ü Sesuai dengan warnanya bakteri Lactobacillus casei termasuk ke dalam bakteri gram positif.

ü Pewarnaan gram merupakan pewarnaan yang digunakan untuk mengelompokan bakteri gram positif dan gram negatif.

ü Prinsip pewarnaan gram didasarkan pada perbedaan struktur dinding sel bakteri ;sehingga menyebabkan perbedaan reaksi dengan permeabilitas zat warna dan penambahan larutan pencuci (Dwidjoseputro 1998)

ü Cryatl violet atau ungu gentian adalah pewarna triarylmethane. Pewarna ini digunakan sebagai histologis noda dalam metode gram klasifikasi bakteri. Crystal violet memiliki sifat-sifat anti bakteri, jamur dan obat cacing, dan sebelumnya penting sebagai antiseptik topikal (Sutedjo,1991)

v      KESIMPULAN

Dari kegiatan praktikum tersebut dapat disimpulkan bahwa bakteri Lactobacillus casei merupakan bakteri gram positif. Serta organisme yang yang dapat menahan zat pewarna setelah dicuci dengan alkohol disebut organisme gram positif, dimana indikasinya menunjukkan warna ungu.